一、 細(xì)胞培養(yǎng)條件

細(xì)胞英文名稱(chēng)：MGC803 

細(xì)胞中文名稱(chēng)：人胃癌細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

培養(yǎng)體系：DMEM+10%FBS  

傳代方法：建議第一次 1:2 傳代 傳代情況：2 天換液

備注：收集瓶中培養(yǎng)基，留作過(guò)渡培養(yǎng)1980年建系，人胃癌低分化黏液腺癌組織小塊用 RPMI-1640 培養(yǎng)液培養(yǎng)4天細(xì)胞開(kāi)始生長(zhǎng)，首次傳代 8 日。免疫抑制的 Wistar 雄幼大鼠皮下移植成功。  

二、細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到 細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán) 格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置 2-4 小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò) 80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng) 液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過(guò) 80%匯合度時(shí)， 根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理 完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外 一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基 混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。然 后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二 天換液并檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)， 輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按 5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 5-6 ml 培養(yǎng)液 的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或 安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿，加入 5ml 左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò) 80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)， 視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò) 80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。